广泛应用于临床的术中冰冻病理诊断是在疾病手术治疗的关键时刻（如癌症手术中）、用冰冻组织做出的一种快速病理检查，其目的是要在手术过程中快速确定病变性质、明确手术切缘是否充分、明确癌症有无淋巴结转移，及时对手术方案进行调整，从而提高手术治疗效果。但是术中冰冻病理诊断毕竟是快速病理检查方法之一，它的应用和诊断准确率受到很多因素的制约，影响术中冰冻诊断准确性主要有三大方面因素：组织样本和技术因素、病理诊断因素以及其它人为因素。

 组织样本因素

1、标本质量：准确的术中冰冻诊断对标本是有严格要求的，许多样本如毛发、线头、骨碎片及其它硬物无法制片，只可以做大体描述性诊断。许多含过多脂肪、软骨，钙化及严重纤维化的组织也会增加制片难度，其裹挟及相连的正常组织在冰冻制片过程中容易脱片。另外，送检组织过小过碎、组织电灼损伤都难以对组织形态做出观察诊断，组织溶解、污染亦无法制片，或可能对诊断造成干扰。

2、取材问题：正确的取材是保证准确病理诊断的关键条件。病理医师在取材之前首先要对样本进行大体检查 （包括记录样本体积和重量等），确定样本的组织来源、手术切除方法和手术边缘，并用有色染料对手术边缘进行定位。

在大体检查完成后，病理医师方可用手术刀片小心、充分地切开标本，再对样本组织进行全面细致的观察，以免遗漏微小病变。取材时要避开出血坏死区，按照取材规范对重点病变、病变与周围组织交界区进行描述和取材。样本的取材应该注意组织块不能太大太厚，最佳规格如下：组织长度和宽度建议小于24mmX24mm， 组织厚度建议小于2mm。此外，水冷却时体积会膨胀，变成冰晶时体积膨胀达9%，导致组织、细胞质和核的结构都产生假象，破坏组织学细微特征，因此取材时应用纱布或滤纸将组织表面水分吸干。

3、技术问题：多数切片机机箱温度设为-25℃，同时冰冻锤配合可迅速冰冻组织块、减少冰晶形成。其实不同组织的冰冻度是有差异的，肝、脑、淋巴结等组织标本温度可调整至-12—-18℃，而脂肪组织要调整至-50℃，肾、肝等组织因为质地嫩脆，不宜冰冻时间过长，以免造成细胞过分肿胀或收缩、结构模糊，导致切片假象，影响诊断。

冰冻切片的厚度和是否全面， 对阅片结果影响巨大，要求标本包埋平整、修片至最大切面、避免小裂隙及皱褶折叠，切片厚度控制在5µm 左右（3-7µm）。固定液和染液使用次数、染液温度、染色时间等也都会影响制片效果，有研究显示：染液温度以35℃为宜，且苏木素染色环节中，使用微光波干预制片效果最好、清晰度最高。此外，还应做到封片无气泡，标签粘牢、编号清晰。

病理诊断因素

1、术中冰冻组织的病理诊断是以基于组织和细胞的HE染色形态学为主的经验性工作，病理医师的业务水平及熟练程度是影响冰冻诊断准确性的最重要因素。虽然免疫组化、特殊染色也逐渐开始应用在术中冰冻病理诊断中，但是仍属于早期阶段，其试剂种类尚不够丰富，病理医师的使用经验也有待进一步积累，目前冰冻病理诊断仍然仅以传统HE染色片诊断为主，这就要求签发术中冰冻诊断报告的病理医师一定要具备系统扎实的病理诊断功底和丰富的诊断经验，对各系统的常见病、良性肿瘤与恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断要点做到心中有数，同时要具备一定的临床和影像学知识基础，有能力和临床医师有效沟通交流，并解答其手术中遇到的问题。

2、理想状态下，外科医师及病理医师应当提前讨论病例，病理医师应全面浏览患者的临床病史及影像学、实验室检查资料。外科医师提供详细病史、完整影像学资料及术中所见对术中冰冻诊断至关重要。事实上，随着医学的快速发展，各级各类手术中冰冻诊断的病例数越来越多，对于有的病例，病理医师只能是在短时间内对少量组织在显微镜下观察，为临床提供一些信息，术中冰冻诊断可能不是最终诊断，这时就要求外科医师根据病理医师提供的信息，结合临床资料综合考虑疾病的诊断，制定手术方案。

其它人为因素

1、手术医师送检标本的质量对术中的诊断准确性至关重要。临床医师应该充分了解术中冰冻的适用范围、慎用范围及不宜应用范围，避免送检过小的标本（长径≤0.2cm者）、脂肪组织、骨组织、传染性标本等。

2、手术医师在取材时应当准确、完整，保持肿瘤原始状态，不可自行剖开或离断病变标本，以免影响病理医师对标本大体形态和包膜等情况的观察。

3、病理医师应和手术医师及时交流，制定术中冰冻病理诊断的使用范围和规范，并及时向手术医师反馈冰冻诊断的新技术和新进展，帮助手术医师在手术中采取符合病理诊断需求的样本，从而保证冰冻诊断的准确性。

综上所述，提高术中冰冻诊断的时效性和准确性任重道远。在术中冰冻病理诊断过程中，要明确病理医师/技师的岗位职责、提升业务技术水平、注重工作的规范性和细节处理、畅通科室之间的沟通，对制片及诊断都应该有质量控制并持续改进。与此同时，业界也期待技术的创新与迭代，使术中冰冻病理诊断能够更规范和更精确，及时为临床医师提供更为可靠的诊断依据，从而提高疾病的治疗效果。